一，液相色譜儀操作過程：

1、 開機操作：
（1）、打開電源，用Harb相連接時，注意Harb電源，打開計算機，打開Bootp Server（一般啟動時已打開）；
（2）、自上而下打開個組件電源，Bootp Server里顯示有信號時（有六行字符），打開工作站（先打開On line）；
（3）、打開沖洗泵頭的10％異丙醇溶液的開關(guān)（需用針捅抽），控制流量大小，以能流出的zui小流量為準；
（4）、注意各流動相所剩溶液的容積設(shè)定，若設(shè)定的容積低于zui低限會自動停泵，注意洗泵溶液的體積，及時加液；
（5）、使用過程中要經(jīng)常觀察儀器工作狀態(tài)，及時正確處理各種突發(fā)事件。
2、 先以所用流動相沖洗系統(tǒng)一定時間（如所用流動相為含鹽流動相，必須先用水沖洗20分鐘以上再換上含鹽流動相），正式進樣分析前30min 左右開啟D燈或W燈，以延長燈的使用壽命；
3、 建立色譜操作方法，注意保存為自己命名的Method，勿覆蓋或刪除他人的方法及實驗結(jié)果；
4、 使用手動進樣器進樣時，在進樣前和進樣后都需用洗針液洗凈進樣針筒，洗針液一般選擇與樣品液一致的溶劑，進樣前必須用樣品液清洗進樣針筒3遍以上，并排除針筒中的氣泡；
5、 溶劑瓶中的沙芯過濾頭容易破碎，在更換流動相時注意保護，當發(fā)現(xiàn)過濾頭變臟或長菌時，不可用超聲洗滌，可用5%稀硝酸溶液浸泡后再洗滌；
6、 實驗結(jié)束后，一般先用水或低濃度甲醇水溶液沖洗整個管路30分鐘以上，再用甲醇沖洗。沖洗過程中關(guān)閉D燈、W燈；
7、 關(guān)機時，先關(guān)閉泵、檢測器等，再關(guān)閉工作站，然后關(guān)機，zui后自下而上關(guān)閉色譜儀各組件，關(guān)閉洗泵溶液的開關(guān)；
8、 使用者須認真履行儀器使用登記制度，出現(xiàn)問題及時向老師報告，不要擅自拆卸儀器。
 （續(xù)）
1、 操作過程若發(fā)現(xiàn)壓力很小，則可能管件連接有漏，注意檢查。當出現(xiàn)錯誤警告（各組件指示燈均為紅色），一般為漏液，其中一個感應(yīng)器中已有溶劑，漏液故障排除后，擦干，點擊On line操作界面中的Instrument/System Off，然后再點擊操作界面中的Instrument/System On即可。
2、 連接柱子與管線時，應(yīng)注意擰緊螺絲的力度，過度用力可導(dǎo)致連接螺絲斷裂。柱接頭處易發(fā)生漏液，可能情況為接頭Fittings中間的管子未和接口處貼緊。不同廠家的管線及色譜柱頭結(jié)構(gòu)有差異，不要混用，必要時可使用EK管及活動接頭；
3、 操作過程若發(fā)現(xiàn)壓力非常高，則可能管路已堵，應(yīng)先卸下色譜柱，然后用分段排除法檢查，確定何處堵塞后解決。若是保護柱或色譜柱堵塞，可用小流量流動相或以小流量異丙醇沖洗，還可采用小流量反沖的辦法（新柱不提倡），若還是無法通暢，則需換柱；
4、 運行過程中自動停泵，可能為壓力超過上限或流動相用完；
5、 樣品瓶中樣品較少，自動進樣器進樣針無法到達液面，可采用調(diào)低進樣針進樣高度的辦法，注意設(shè)置時不要使進樣針碰到瓶底，微量樣品分析應(yīng)使用微量樣品瓶；
6、 自動進樣器進樣針未與樣品瓶瓶口對準時，需重新定位。
7、 泵壓不穩(wěn)或流量不準，可能為柱塞桿密封圈問題或seal wash墊圈問題，需更換；
8、 基線產(chǎn)生不規(guī)則噪聲，可能原因為系統(tǒng)不穩(wěn)定或沒達到化學(xué)平衡（使其平衡，若用離子對試劑，在使用使需要足夠的時間和溶劑體積，色譜柱才能達到足夠的平衡），流動相被污染（更換流動相，清洗儲液器、過濾器，沖洗并重新平衡系統(tǒng)），色譜柱被污染（為證明可能的原因更換系統(tǒng)的色譜柱或使用一根同類的被證明性能好的色譜柱），檢測器不穩(wěn)定；
9、 短期有規(guī)則的噪聲，可能原因為泵壓不穩(wěn)或泵脈沖，調(diào)節(jié)溶劑不適當（如兩種溶劑的互溶性問題），泵入口管路松或堵塞，泵太臟，泵柱塞磨損，檢測器不穩(wěn)定；
10、 長期有規(guī)則噪聲，可能原因為室溫不穩(wěn)（未使用柱溫箱）或使用柱溫箱不當；
11、 基線漂移，可能原因為系統(tǒng)不穩(wěn)或沒有達到化學(xué)平衡，室溫不穩(wěn)（未使用柱溫箱），流動相污染或分解，柱污染，檢測池泄漏，系統(tǒng)泄漏，固定相流失（另選流動相，另選色譜柱），測定的波長選擇錯誤（對溶劑有吸收），樣品組分保留太長（用強度合適的溶劑清洗色譜柱），檢測器不穩(wěn)定；
12、 每次進樣時的保留時間不重復(fù)，可能原因為系統(tǒng)不穩(wěn)或未達到化學(xué)平衡，由于氣泡、各部件磨損等原因引起的泵壓或泵脈沖輸液不穩(wěn)定，進樣體積太大或樣品濃度太高平衡被破壞，溶劑配比不合適，柱被污染；
13、 無峰，可能原因為檢測器選擇錯誤，使用錯誤的流動相，樣品降解；
14、 色譜峰比預(yù)計的小，可能原因為進樣體積錯誤，檢測器燈故障，進樣問題（瓶號錯、進樣體積不合適、進樣錯誤、針頭堵塞）；
15、 峰變寬，可能原因為進樣體積太大或樣品濃度太高，過濾器、保護柱入口、柱入口或連接管路有部分堵塞，檢測器時間常數(shù)設(shè)置錯誤，進樣器問題（如閥漏、針頭堵塞或損壞），柱或保護柱被污染，對流動相來說樣品溶劑太強，使用錯誤的色譜柱，溫度變化；
16、 出現(xiàn)雙峰/肩峰，可能原因為保護柱或柱入口部分阻塞，柱或保護柱被污染，柱性能下降，保護柱失效，進樣體積太大或樣品濃度太高（樣品過載），平衡破壞；
17、 前沿峰，可能原因為進樣體積太大或樣品濃度太高（樣品過載），平衡破壞，對于流動相來說樣品溶劑非極性太強（對于反相柱），柱或保護柱被污染，柱性能下降，保護柱失效；
18、 脫尾峰，可能原因為柱或保護柱被污染，柱性能下降，保護柱失效，進樣器問題（如閥漏等），檢測器時間常數(shù)設(shè)置錯誤；
19、 出現(xiàn)鬼峰，可能原因為流動相被污染，樣品預(yù)處理時產(chǎn)生降解或混入雜質(zhì)，先前進樣的流出物，樣品定量管清洗不當，注射器臟，柱被污染，進樣裝置被污染，流動相中含有穩(wěn)定劑/穩(wěn)定劑變化。

二，液相色譜柱使用注意事項：

1、 使用前仔細閱讀色譜柱附帶的說明書，注意適用范圍，如pH值范圍、流動相類型等；
2、 使用符合要求的流動相；
3、 使用保護柱；
4、 如所用流動相為含鹽流動相，反相色譜柱使用后，先用水或低濃度甲醇水（如5％甲醇水溶液），再用甲醇沖洗。
5、 色譜柱在不使用時，應(yīng)用甲醇沖洗，取下后緊密封閉兩端保存；
6、 不要高壓沖洗柱子；
7、 不要在高溫下長時間使用硅膠鍵合相色譜柱；
三，流動相操作：

1、 流動相應(yīng)選用色譜純試劑、高純水或雙蒸水，酸堿液及緩沖液需經(jīng)過濾后使用，過濾時注意區(qū)分水系膜和油系膜的使用范圍；
2、 水相流動相需經(jīng)常更換（一般不超過2天），防止長菌變質(zhì)；
3、 使用雙泵時，A、B、C、D四相中，若所用流動相中有含鹽流動相，則A、D（進液口位于混合器下方）放置含鹽流動相，B、C（進液口位于混合器上方）放置不含鹽流動相；
A、B、C、D四個儲液器中其中一個為棕色瓶，用于存放水相流動相。